聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

什么是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)？

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）是一項(xiàng)用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它是在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下，將該段DNA擴(kuò)增至足夠數(shù)量，以便進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析。

影響PCR實(shí)驗(yàn)的因素之一 —— 耗材

在PCR實(shí)驗(yàn)中，影響擴(kuò)增效果的因素有很多。我們能想到的有dNTP的質(zhì)量與濃度、模板核酸的量與純化程度、引物的設(shè)計(jì)、DNA聚合酶的濃度、擴(kuò)增長度等問題。

實(shí)際上，使用的耗材也可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，而這往往被我們所忽略。因此在選擇實(shí)驗(yàn)耗材前，我們還需要了解PCR耗材相關(guān)的特性和術(shù)語。

如何選擇合適的PCR耗材

品牌：鋼士特GUNSTER(中國臺灣)

名稱：PCR八聯(lián)排管(管蓋分離)

貨號：MB-P08B

規(guī)格：0.2ml  平蓋

品牌：鋼士特GUNSTER(中國臺灣)

名稱：PCR八聯(lián)排管(管蓋分離)

貨號：MB-P08D

規(guī)格：0.2ml  凸蓋

品牌：鋼士特GUNSTER(中國臺灣)

名稱：PCR 96孔板

貨號：MB-P96

規(guī)格：0.2ml  無裙邊  透明

半裙邊板：可適配標(biāo)簽或應(yīng)用條碼，適合自動(dòng)化應(yīng)用，且有著較好的移液穩(wěn)定性。

全裙邊板：非常適用于自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，也可適配標(biāo)簽及應(yīng)用條碼。機(jī)械強(qiáng)度較好，可適用于凸出模塊的PCR儀，且移液過程中穩(wěn)定性高。

PCR技術(shù)的臨床應(yīng)用

單克隆抗體技術(shù)曾使免疫學(xué)理論與實(shí)踐有了新的突破，近幾年來PCR技術(shù)使分子生物學(xué)及相關(guān)學(xué)科發(fā)生了一次方法學(xué)的革命。在不到10年的時(shí)間內(nèi)，在以下幾個(gè)領(lǐng)域中PCR技術(shù)已具有實(shí)用價(jià)值，且其應(yīng)用范圍正在不斷擴(kuò)大中。

1、遺傳病的產(chǎn)前診斷

用胎兒羊膜細(xì)胞，羊水或甚至母血可以檢查胎兒的性別，這在與性染色體關(guān)聯(lián)遺傳病診斷中是必要的。對于高發(fā)的遺傳病，如地中海貧血、鐮刀狀細(xì)胞貧血、凝血因子缺乏、DMD等已在臨床應(yīng)用多年，為優(yōu)生優(yōu)育作了貢獻(xiàn)，對于有遺傳傾向的疾病尤其是老年性疾病，如糖尿病、高血脂癥、甚至腫瘤中的一部分，均是當(dāng)前研究的重點(diǎn)，近期內(nèi)可望有突破。

2、致病病原體的檢測

這些外源入侵的基因，一旦闡明其部分核酸序列，就可以設(shè)計(jì)引物或探針，用PCR、PT-PCR或雜交方法來檢測，其范圍包括細(xì)菌、病毒、原蟲及寄生蟲、霉菌、立克次體、衣原體和支原體等一切微生物，PCR診斷的特點(diǎn)是可以選擇其基因中的保守區(qū)作通用檢測，也可以選定差異較大的基因部位作分型檢測。既可以做一病原體的專用檢測，也可以將有關(guān)病毒、細(xì)菌中不同的品種作一次多元檢測。而且檢測的靈敏度和特異性都遠(yuǎn)高于當(dāng)前的免疫學(xué)方法，所需時(shí)間也已達(dá)到臨床要求，這對于難于培養(yǎng)的病毒（乙肝），細(xì)菌（如結(jié)核、厭氧菌）和原蟲（如梅毒螺旋體）等來說尤為適用。

3、癌基因的檢測和診斷

雖然對癌基因的研究大部分還屬于基礎(chǔ)階段，但癌變是由基因變異所導(dǎo)致的這一基本事實(shí)已無庸置疑，所以癌基因、抗癌基因入抗轉(zhuǎn)移基因的研究，離開分子水平的診斷手段是無法進(jìn)行的，臨床上已可應(yīng)用的例子有白血病殘留細(xì)胞的定量（包括慢粒和急粒），肺癌中P53及Rb等抗癌基因的失活，神經(jīng)質(zhì)瘤N-myc基因的激活和表達(dá)。通過原位雜交觀察特定癌基因及抗轉(zhuǎn)移基因的植入和反義寡核苷酸對強(qiáng)表達(dá)癌基因的阻斷均已成為近代基因治療的著眼點(diǎn)。

4、DNA指紋、個(gè)體識別、親子關(guān)系鑒別及法醫(yī)物證

這一部分所矚目的課題已經(jīng)在某些國家取得法律認(rèn)可。肌紅蛋白小衛(wèi)星基因，β-珠蛋白基因、ApoB基因等的多肽性和重復(fù)次數(shù)的差異都被應(yīng)用于鑒定，其靈敏度已達(dá)到一根頭發(fā)、一個(gè)細(xì)胞取得個(gè)體特征圖譜，這一領(lǐng)域也已發(fā)展到骨髓或臟器移植配型及動(dòng)物種系的研究中。

5、動(dòng)、植物檢疫

靈敏、特異、快速診斷檢測方法是我國進(jìn)出口口岸的門衛(wèi)，檢查出入國境的人員、動(dòng)、植物（種畜、種籽）等是否攜帶烈性傳染病（艾滋、動(dòng)物病毒、植物病毒等）病原體，食品、飼料等是否帶沙門氏菌等均需要基因診斷手段將這些病菌拒之于國境之外，是提高我國綜合國力的必要保證。

6、高科技生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用

在轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物中檢查植入基因的存在。PCR技術(shù)尚可應(yīng)用于基因拼接、測序等領(lǐng)域。