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酵母和細菌蛋白質的代謝放射標記的方法
發布時間： 2021-11-08 點擊次數： 1576次材料與儀器細胞
基本培養基實驗步驟1. 接種細胞于只含有必需氨基酸和輔因子的已知成分的基本培養基，于合適溫度中度振蕩培養過夜。
2. 用新鮮的基本培養基稀釋培養物，繼續溫育至 107 細胞/ml （酵母）或對數期中期（細菌）。
3. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細胞，用無硫酸鹽基本培養基重懸至 107 細胞/ml（酵母）或 5X108 細胞/ml（細菌）。
4. 加 H235SO4 至終濃度 20 μCi/ml。于適宜溫度輕度振蕩培養 1 小時（酵母）或 20 分鐘（細菌）。
5. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細胞，吸出培養基，倒入放射性廢料桶。
6. 用冰冷的基本培養基重懸細胞，如第 5 步離心收集細胞。將上清倒入放射性廢料桶。用巴氏滴管吸去離心管壁殘存的上清。
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