步驟

1. 混合 10 ml 全血和 10 ml RPMI 生長培養(yǎng)基。
   
   生長培養(yǎng)基（RPMI1640 800 ml，F(xiàn)BS 200 ml，2 mmol/L-谷氨酰胺，5 μg/ml 兩性霉素，50 μg/ml 慶大霉素）
   
   2. 取 15 ml 無菌離心管，加 3 ml Histo-paque1077（Sigma），在其上加 4 ml 稀釋血，分離淋巴細(xì)胞。
   
   3. 室溫 300 g 離心 30 分鐘，棄上層清亮血漿。
   
   4. 收集不透明淋巴細(xì)胞層，細(xì)胞懸液倒入 50 ml 無菌離心管。
   
   5. 20 ml RPMI 1640 生長培養(yǎng)基洗兩次，室溫 300 g 離心 10 分鐘。
   
   6. 10 ml 血分離的細(xì)胞懸于 1.0 ml 含 EB 病毒的上清。
   
   7. 細(xì)胞懸液（1.0 ml）放入 25 cm2 組織培養(yǎng)瓶，垂直放置，37℃ 5% CO2 孵育 1~3 小時。
   
   8. 孵育后，加入 3 ml 含 0.2 μg/ml 刀豆凝集素A 的 RPMI 1640 生長培養(yǎng)基，水平放置，使細(xì)胞均勻分布于全生長面。
   
   9. 每周加 1 ml 含刀豆凝集素A 的新鮮 RPMI 1640 生長培養(yǎng)基，不要吸出原培養(yǎng)基。

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