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    何時用瓶皿培養(yǎng),何時用孔板培養(yǎng)

    發(fā)布時間: 2024-04-18  點擊次數(shù): 1353次

    細胞的體外培養(yǎng)需要依附在人工附著物上,大多數(shù)脊椎動物細胞在人工附著物上會呈現(xiàn)為單層生長的狀態(tài)。


    所謂的人工附著物,就是常見的多孔板、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿。


    用什么類型的附著物來培養(yǎng)細胞,是有什么依據(jù)的呢?這一期內容就講講這個話題。


    基本概念

    從材料分類上看,常見的細胞培養(yǎng)附著物分為一次性的塑料和玻璃。


    先說玻璃,成本低、可重復使用,透光性好,但由于其清洗過程復雜,不易保存,現(xiàn)在已逐漸被一次性塑料取代了。


    一次性塑料的主要成份是聚丙乙烯,由人工合成,質地均勻,產量大成本低,能為細胞提供一個良好的生長表面。


    這里有一個小細節(jié),有的塑料培養(yǎng)器皿會標注“已表面處理“,這是什么意思呢?


    因為聚丙乙烯生產好以后,其表面是疏水性的,這不利于細胞貼壁生長,因此,需要進行特殊的工藝處理,例如射線照射、電離輻射,這樣處理過的表面細胞才能更好的貼在上面生長。


    選擇器皿的原則

    選擇用多孔板培養(yǎng)細胞還是培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細胞,是根據(jù)你培養(yǎng)細胞的目的來決定的。


    如果培養(yǎng)細胞的目的是通過細胞倍增,最終獲得大量細胞或細胞分泌物,則應該使用培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)細胞。


    如果目的是為了進行微量的、多次的重復實驗來分析細胞或細胞產物,則應該使用多孔板來培養(yǎng)。


    確定培養(yǎng)目的以后,應該根據(jù)具體情況選擇不同規(guī)格的器皿。以下分類說明。


    1 選擇培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿培養(yǎng)細胞

    首先,根據(jù)期望獲得的細胞產量來選擇,培養(yǎng)瓶是通過表面積來命名的,例如T25、T75、T175,數(shù)字就是表面積,25就是25cm2,如此類推;

    培養(yǎng)皿是按照其直徑來命名的,例如3.5cm、9cm。以下,是按照不同規(guī)格的培養(yǎng)器皿所能培養(yǎng)的細胞數(shù)量繪制的參考圖,有興趣的同學可以保存下來以后用。

    何時用瓶皿培養(yǎng),何時用孔板培養(yǎng)

    其次,根據(jù)實驗操作熟練程度來選擇,培養(yǎng)皿的操作比較方便,不管是換液、傳代、還是收獲細胞,但因為其開口很大,所以容易污染,如果你是新手,不建議直接用培養(yǎng)皿養(yǎng)細胞。

    何時用瓶皿培養(yǎng),何時用孔板培養(yǎng)

    最后,如果選擇培養(yǎng)瓶培養(yǎng),還應該盡量選擇有斜肩設計、帶透氣孔瓶蓋的型號。

    前者可以避免培養(yǎng)瓶平放后,過多的培養(yǎng)基接觸瓶蓋造成污染,后者可以保持內外的二氧化碳濃度一致。

    如果瓶蓋不透氣,那在放進培養(yǎng)箱時,應擰松一圈,以便內外氣體能順利交換。

    2 選擇多孔板培養(yǎng)細胞

    首先,也是要判斷你的實驗需要多少細胞來進行分析,以此來選擇多孔板的規(guī)格。大家同樣可以參照上面的圖表。

    有極個別的孔板,孔底部是錐形底或圓底,這種規(guī)格的多孔板適用于非組織型的細胞培養(yǎng),對于大多數(shù)貼壁生長的細胞來說不適合。

    何時用瓶皿培養(yǎng),何時用孔板培養(yǎng)

    選擇好合適的孔板后,在培養(yǎng)階段,有2點注意事項:

    A 多孔板會帶板蓋,但其密封性不好,在培養(yǎng)箱內會造成邊緣的孔位蒸發(fā)效率過高,進而影響細胞生長速率。

    有條件的同學,可以在蓋上板蓋后在縫隙處貼一圈封口膜。或者舍棄邊緣孔位,并采用添加培養(yǎng)基來代替。

    B 當細胞種入孔內以后,不應該再進行過多的震動,例如晃動、抖動培養(yǎng)板,而應該輕緩的放入培養(yǎng)箱中。

    如果培養(yǎng)箱由多人共用,還應該考慮大家頻繁開關箱門、拿放孔板造成的震動,這些不利因素都應該盡量減少。

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