1.平板長菌，但挑的單克隆菌落搖不起來？

產(chǎn)生原因及解決辦法：

（1）挑取的單克隆為雜菌，呈假陽性。出現(xiàn)這種情況的原因包括：①配制平板過程中，加入抗生素時溫度過高致使抗生素滅活；②配制平板過程中，抗生素濃度過低；③平板培養(yǎng)時間太長導(dǎo)致抗生素失效。

（2）液體培養(yǎng)基的抗生素使用錯誤。

（3）液體培養(yǎng)基抗生素濃度過高，導(dǎo)致大腸桿菌生長緩慢。

（4）菌液保存太久，導(dǎo)致菌的活力過低。辦法：重新劃線涂板，挑取單克隆。

（5）自己制備的感受態(tài)細胞受到雜菌污染。

（6）噬菌體污染。現(xiàn)象描述：菌液清亮或渾濁后變?yōu)榍辶粒撞坑谐恋怼＾k法：甲醛熏蒸超凈臺，對整個實驗環(huán)境進行消毒；重新提質(zhì)粒，重新轉(zhuǎn)化。

2. 平板長菌，挑的單克隆菌落能搖起來，但菌液PCR沒有條帶？

產(chǎn)生原因及解決辦法：

（1）重組或連接失敗。出現(xiàn)這種情況的原因包括：①質(zhì)粒沒有切開；②質(zhì)粒切開后自連。

（2）搖菌時間過長，菌液濃度過大。辦法：搖菌不超過6小時，4-5小時即可。

（3）PCR反應(yīng)體的原因。出現(xiàn)這種情況的原因包括：①酶；②引物。辦法: 換酶，使用熱啟動酶；使用載體通用引物。

3. 平板長菌，挑的單克隆菌落能搖起來，但菌液PCR與陽性對照的大小不對？

產(chǎn)生原因及解決辦法：

（1）引物特異性差，導(dǎo)致擴增到大腸桿菌的基因。辦法：使用載體的通用引物。

（2）目的基因存在所用酶的酶切位點，酶切位點切錯，僅部分連接，導(dǎo)致片段變小。

（3）小片段核酸污染。這些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，與引物互補后擴增出條帶。

（4）瓊脂糖凝膠電泳會產(chǎn)生偏差，相差一點極有可能是目的條帶。辦法：送測序進行驗證。

4. 平板長菌，挑的單克隆菌落能搖起來，但菌液PCR出現(xiàn)多條條帶？

產(chǎn)生原因及解決辦法：

（1）引物特異性差，導(dǎo)致擴增到大腸桿菌的基因。辦法：使用載體的通用引物。

（2）Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低，PCR循環(huán)次數(shù)過多。

（3）酶量過多或酶的質(zhì)量差。

（4）菌落污染。

5. 平板長菌，挑的單克隆菌落能搖起來，菌液PCR也有目的條帶，但測序無信號？

產(chǎn)生原因及解決辦法：

（1）未連接到載體的目的片段仍存在在菌液里，單克隆的菌落為原始質(zhì)粒，菌液PCR有條帶。

（2）污染。出現(xiàn)這種情況的原因包括：①菌液污染。②酶，引物，Buffer等污染。③氣溶膠污染。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學(xué)進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務(wù)。