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發(fā)布時(shí)間： 2022-10-11 點(diǎn)擊次數(shù)： 1712次理想的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。但是病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點(diǎn)。下面分享幾個(gè)經(jīng)典的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法：1.人工脂質(zhì)體法帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物，進(jìn)而可被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染。這種方法幾乎適用于所有細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率高、重復(fù)型好，但轉(zhuǎn)染時(shí)需要去除血清，轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大。2.磷酸鈣法通常穿了“隱身衣”核酸分子在“照妖鏡”磷酸鈣的作用下可形成“肉眼可見(jiàn)”的磷酸鈣-DNA共沉淀，可使共沉淀中濃縮DNA分子與細(xì)胞表面結(jié)合并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。該法可用于瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。然而因其對(duì)pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結(jié)果容易出現(xiàn)差異，且對(duì)許多類型的細(xì)胞培養(yǎng)物(尤其是原代細(xì)胞)具有細(xì)胞毒性，轉(zhuǎn)染效率較差。3.電穿孔法此法利用高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，使得DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入穩(wěn)定/瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染，適用于所有類型的細(xì)胞，但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大，且需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件。其他物理基因輸送法還包括基因槍、直接顯微注射等方式。前者又稱為粒子轟擊，可將包裹著核酸的顯微重金屬顆粒告訴射入受體細(xì)胞內(nèi)，適用于瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染。該技術(shù)需要昂貴的設(shè)備，且細(xì)胞死亡率較高。而后者則是通過(guò)精細(xì)的注射針將核酸送入胞漿中，一次只能輸送一個(gè)細(xì)胞中，適用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或輸送人工染色體。
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