考染法蛋白定量試劑盒（蛋白制備）

產(chǎn)品介紹

1. 產(chǎn)品描述：

考馬斯亮藍(lán)蛋白定量法又稱Bradford法，是蛋白質(zhì)快速定量方法之一。考馬斯亮藍(lán)（Coomassie brilliant blue G-250）與蛋白質(zhì)結(jié)合后染料的最大吸收峰由465 nm變?yōu)?95 nm，溶液的顏色由棕色變?yōu)樗{(lán)色，在595 nm波長下測定的吸光度值與蛋白含量成正比。靈敏度比Lowry法高4倍，與BCA法相當(dāng)。反應(yīng)迅速，2 min達(dá)到平衡并在1 h內(nèi)保持穩(wěn)定。操作簡便，只需要一種反應(yīng)試劑。干擾物質(zhì)少，K+、Na+、Mg2+離子、Tris、葡萄糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、(NH4)2SO4、乙醇、EDTA等均不干擾此測定法。本試劑盒采用改良考染法和優(yōu)化的試劑組成以及優(yōu)化的測定方案，可對0.5~2000 µg/mL濃度范圍的蛋白進(jìn)行線性檢測，顯著提高了蛋白檢測靈敏度。

2. 產(chǎn)品特點(diǎn)：

（1）簡單便捷、靈敏度高；

（2）線性標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.5~50、5~500和50~2000 µg/mL；

（3）不受大部分金屬離子或螯合劑影響。

考染法蛋白定量試劑盒（蛋白制備）

使用說明

1. 產(chǎn)品組分：

注：配套5 mg/mL的BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，貨號AC0238：-20℃保存，有效期為12個月。

2. 儲運(yùn)條件：

考馬斯亮藍(lán)溶液置于2~8℃保存，有效期12個月，2~8℃運(yùn)輸；

配套的BSA 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，置于-25~-15℃保存，有效期12個月，干冰運(yùn)輸。

3. 注意事項(xiàng)：

（1）分別在595 nm和450 nm測定OD值，計(jì)算OD594/OD450，以此代替原有的OD595作圖，可明顯提高檢測的精確度和靈敏度約10倍，顯著提高測定的線性關(guān)系，并降低去垢劑的影響。在進(jìn)行超敏感度測定時(shí)可考慮此法；

（2）主要干擾物質(zhì)的終濃度：SDS<0.002%；Triton X-100<0.1%；Tween-20/60/80<0.015%；NaOH<0.1 N；

（3）蛋白-染料結(jié)合物在1 h內(nèi)保持穩(wěn)定，但在5~20 min內(nèi)穩(wěn)定性最好，因此應(yīng)盡快測定。如果放置過久將出現(xiàn)沉淀，或使測定結(jié)果偏低；

（4）染料不結(jié)合精氨酸、賴氨酸及分子量小于3 kDa的短肽，所以不同的蛋白質(zhì)由于精氨酸和賴氨酸含量不同會出現(xiàn)小范圍的測量偏差；小于3 kDa的短肽純品不能用此方法測定；

（5）蛋白-染料結(jié)合物附著在石英比色皿后難以洗去，因此不宜使用石英比色皿。可用玻璃或塑料比色皿，用后立即用95%乙醇或洗滌劑浸泡洗滌。塑料比色皿不可用乙醇長時(shí)間浸泡；

（6）標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該每次新做。但每一稀釋度的BSA標(biāo)準(zhǔn)品可預(yù)先配好-20℃凍存?zhèn)溆茫⒁庠谑褂眠@種非新鮮配制的BSA時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的某一些點(diǎn)偏差較大，說明稀釋的BSA已經(jīng)壞掉應(yīng)予重配。